PCR & qPCR
Réaction de polymérisation en chaîne
La réaction de polymérisation en chaîne (PCR = Polymerase-Chain-Reaction) est un processus enzymatique pour l’amplification in vitro de la substance héréditaire (ADN). Elle est constituée des trois étapes de dénaturation, d’hybridation et d’élongation. La PCR compte parmi les méthodes standard de quasiment tous les laboratoires Life Science. Le processus est utilisé pour un grand nombre d’applications, telles que le clonage ADN, le diagnostic de maladies héréditaires ou infectieuses, l’analyse fonctionnelle de gènes, les tests de paternité ou les analyses judiciaires.
Des variantes encore plus sensibles sont ainsi développées en permanence. L'une des principales variantes reste encore et toujours la qPCR (PCR quantitative). Cette méthode donne des informations sur la quantité d’ADN amplifié. BRAND offre des articles consommables PCR en qualité de salle blanche pour des applications PCR et qPCR exigeantes pour lesquelles la qualité et la pureté sont décisives. La surveillance en direct de notre salle blanche validée de classe ISO 8 et le haut niveau d’automatisation garantissent la pureté des produits PCR de BRAND. Des laboratoires indépendants, homologués selon l’ISO 17 025, contrôlent nos articles PCR concernant l’absence d’ADN, de DNase, de RNase et d’endotoxines / de pyrogènes.
Vous trouverez de plus amples informations à ce propos ci-dessous à la section Niveaux de qualité BIO-CERT®
Les consommables pour les sciences de la vie de BRAND répondent aux normes de qualité les plus élevées et offrent des niveaux de qualité adaptés à chaque application. Tous les produits portant le niveau de qualité CERTIFIED LIFE SCIENCE QUALITY et les labels de qualité BIO-CERT® sont fabriqués à partir de matières premières pures de haute qualité et sont testés en permanence quant à leur qualité et leur fonctionnement. Outre le label général BIO-CERT® CERTIFIED QUALITY, des niveaux de qualité spécifiques sont disponibles pour la PCR, la culture cellulaire et la manipulation de liquides. Vous trouverez ainsi facilement et rapidement les produits adaptés à votre application.
Les bonnes premières amorces, les réactifs corrects, la température optimale d’hybridation et la durée idéale des différentes étapes PCR sont des exigences auxquelles chaque utilisateur est confronté pour l’établissement de son PCR. Pour que la réaction PCR soit stable et qu’aucune complication n’apparaisse dans la routine ultérieure, il est important d’appliquer la méthode optimale. Il faut donc réaliser de nombreux essais préalables pour vérifier l’influence des différents paramètres sur la PCR individuelle.
BRAND offre une vaste gamme de tubes individuels PCR et de bandes PCR. Le choix des produits permet un travail optimal et économique même avec un petit nombre d’échantillons.
Les tubes individuels PCR de BRAND avec un volume de 0,2 et 0,5ml sont la solution efficace pour les volumes d’échantillons petits et moyens. Les tubes particulièrement fins et réguliers garantissent pour les PCR un transfert optimal de la température et empêchent fiablement l’évaporation grâce à une fermeture optimale. Vous obtenez ainsi des résultats concluants, même avec de petits volumes d’échantillons.
Pour les volumes d'échantillons moyens, les bandes PCR de 8 et 12 offrent une solution flexible pour vos PCR ou qPCR. Vous avez le choix : couvercle bombé pour une pression supplémentaire à travers le couvercle du thermocycleur ou couvercle plat pour la qPCR. Les bandes de couvercles attachés peuvent être ouverts et fermés à une main, tandis que les bandes de couvercles et de films séparés font leurs preuves dans l’automatisation car les couvercles ne peuvent pas gêner le robot.
L’établissement croissant de nouvelles méthodes PCR est également associé à l’augmentation du nombre d’examens réalisés. La PCR fait partie des processus standard dans de nombreux domaines. En plus des processus avec un volume d’échantillons moyen, les applications à haut débit gagnent aussi de plus en plus en importance afin d’économiser du temps et des coûts. Pour surmonter le volume croissant d’échantillons, une manipulation simple et sûre est indispensable. On recherche l'optimisation des processus et la réduction de la consommation de matériels et de réactifs.
Avec sa vaste gamme de produits pour les plaques PCR, BRAND offre les consommables parfaits pour l’analyse à haut débit. Les épaisseurs de paroi ultra-fines, les surfaces lisses pour éviter les interactions et les différentes couleurs et formes sont des conditions idéales pour couvrir un grand nombre d’applications et d’appareils. L’utilisation dans tous les cycleurs courants est garantie par le format ANSI/SLAS standardisé.
Standard ou low profile ?
Sans cadre, demi cadre, cadre entier
Vous trouverez chez BRAND les consommables adaptés à tous les thermocylceurs courants de marques connues, telles que Applied Biosystems®, Biorad® ou Peqlab®. Notre tableau de compatibilité vous fournit une vue d’ensemble des consommables BRAND PCR adaptés à votre thermocycleur.
Sur demande, nous codons vos plaques PCR avec un code-barres individuel, par ex. avec les types Code 39 (standard), Matrix ou Interleaved 2of5. Les processus en laboratoire sont ainsi encore plus efficaces grâce à la traçabilité automatique des échantillons. Pour utiliser notre service, veuillez renseigner le formulaire en ligne sur www.brand.de/barcode.
Une fermeture sûre des échantillons est indispensable pour les protéger contre la contamination et l’évaporation pendant la PCR elle-même et lors des mesures suivantes. L’étanchéité correcte doit être choisie de manière appropriée au type de test PCR réalisé et au tube PCR utilisé. Pour déterminer par ex. des valeurs fiables lors de la PCR en temps réel, des feuilles ultra-transparentes sont nécessaires car la mesure est réalisée directement dans le cycleur.
En plus du choix de la bonne option de fermeture, la manipulation joue également un rôle important pour la protection efficace de vos échantillons. Film ou bandes de bouchon : BRAND offre la fermeture optimale pour chaque application. Il existe même des options de fermeture confortables pour les volumes d’échantillons particulièrement petits.
Avec des bandes de bouchon PCR, vous fermez les bandes et les plaques PCR avec 24, 48 et 96 puits en toute fiabilité et vous protégez ainsi vos échantillons efficacement contre l’évaporation et les contaminations.
Que vous utilisiez un PCR standard, qPCR ou Digital Droplet PCR, le matériel de départ est toujours précieux et les volumes faibles. Afin de protéger les échantillons et de conserver simultanément la sensibilité, les échantillons PCR doivent être parfaitement fermés.
Plus les volumes d’échantillons sont petits, plus il faut éviter les pertes par évaporation. Grâce au grand choix de films et de bandes, vous obtenez toujours un système parfaitement adapté pour la fermeture en toute sécurité de vos plaques et tubes PCR. Vous en apprendrez plus dans notre Application Note.
Nos racks PCR conviennent à la préparation des échantillons, à la conservation et au stockage de tubes 0,2 ml individuels, de bandes de 8 ou de 12 ainsi que de plaques PCR à 96 puits. Le mini cooler PCR correspondant conserve les échantillons à 4 °C pendant env. 3 heures. La couleur du gel isolant passe de violet à rose à 7 °C.
Pour l’incubation à températures plus élevées, nous recommandons d’utiliser des tubes de réaction avec verrouillage du couvercle pour éviter que les tubes sautent.
Attention : l’accélération centrifuge relative (RCF) dépend du rayon du rotor et de la vitesse de rotation (tr/min) de la centrifugeuse !
Indice g : accélération gravitationnelle
RZB: accélération centrifuge relative
(correspond à l’indice g)
r: rayon du rotor
tr/min: rotation du rotor par minute (vitesse de rotation)
Nous déconseillons l’autoclavage de tubes de réaction. Les autoclaves peuvent être une source de contamination des produits jetables.
Avantages du PP
Les tubes de réaction ne sont pas recommandés pour un entreposage de longue durée. Nous recommandons pour cela des tubes de réaction avec couvercle vissé ou cryotubes.
Plus les volumes d’échantillons sont petits, plus il faut éviter les pertes par évaporation. Grâce au grand choix de films et de bandes, vous obtenez toujours un système parfaitement adapté pour la fermeture en toute sécurité de vos plaques et tubes PCR. Vous en apprendrez plus dans notre Application Note.
Que ce soit pour des tubes PCR individuels lors d’un essai de protocole ou pour des essais à grand débit de processus standardisés avec des plaques à 96 puits ou à 384 puits, le choix du bon consommable permet d’économiser des coûts et du temps et de réduire parallèlement les quantités de déchets. Plus d’informations sur notre vaste gamme de consommables.
Non. Le signal fluorescent généré lors de la PCR quantitative en temps réel ne peut être détecté que par des couvercles plats hautement transparents. Les produits BRAND PCR adaptés aux applications de PCR quantitative en temps réel sont identifiés par l'abréviation q!PCR dans les documents de vente.
Non, il n’est pas autoclavable.
Les articles PCR jetables sont fabriqués dans les conditions ultra-modernes de salle blanche, en polypropylène pur de grande qualité, sans ajout de produits additifs, et sont emballés automatiquement. Des laboratoires indépendants contrôlent régulièrement les produits concernant l’absence d’ADN, de RNase et de DNase.
Les articles PCR jetables sont fabriqués en PP. Le PP peut être stérilisé à la vapeur dans l’autoclave à 121°C (2 bar, conformément à la DIN EN 285). En raison de son épaisseur de paroi très fine et du fait que l’autoclave peut représenter une source de contamination, nous ne recommandons cependant pas cette forme de stérilisation pour ce groupe de produits.
La nouvelle gamme de produits PCR blancs de BRAND offre pour les applications PCR en temps réel des résultats largement meilleurs que les bandes ou plaques transparentes de 8. Les différents produits de cette gamme sont colorés uniformément au Ti02 (dioxyde de titane) afin d’obtenir une réflexion plus efficace des signaux de fluorescence en association avec les surfaces lisses.